Ada berbagai cara yang digunakan untuk memperkirakan populasi
mikroba pada kultur tersuspensi, salah satu cara paling mudah adalah dengan menggunakan larutan standar McFarland dan membandingkannya secara visual dengan standar yang diketahui.
Mc Farland amenggunakan larutan BaCl2 1% dan H2SO4 1% sebagai penyetaraan konsentrasi mikroba. Kriteria kekeruhan McFarland bertujuan untuk menggantikan jumlah bakteri satu-ke-satu dan memperkirakan kepadatan sel yang digunakan dalam prosedur uji antibakteri. Mc Farland umumnya digunakan untuk menghitung bakteri dalam spektrofotometri.
Keuntungan menggunakan standar Mc Farland adalah tidak memerlukan waktu inkubasi yang lama untuk mencapai kepadatan bakteri yang diinginkan. Meskipun memiliki kelemahan akan terjadi perbedaan pandangan dalam penilaian tingkat kekeruhan dari sel bakteri. Oleh karena itu, spektrofotometer dengan panjang gelombang 600 nm (sesuai dengan panjang gelombang E. coli) dapat digunakan untuk menilai kekeruhan. Standar Mc Farland terdiri dari serangkaian tabung dengan perubahan bertahal dari konsentrasi Barium Sulfat. Kepadatan bakteri yang
dihitung dari 101 hingga 1010. Meskipun larutan standar Mc Farland sudah umum dijual dari sumber yang lain (Latex), namun namun larutan standar Mc Farland dapat dibuat secara tradisional menggunakan standar Barium
Sulfat.
Berikut
ini cara membuat larutan standar Mc Farland dengan menggunakan standar Barium
Sulfat:
1.
Buat
larutan 1.175% (b/v) Barium klorida (BaCl2)
2.
Buat
larutan 1% (b/v) Asam sulfat (H2SO4)
3. Campurkan
kedua larutan ini berdasarkan rasio sebagai berikut, dengan
pemberian H2SO4 terlebih dahulu:
Skala
Mc Farland
|
1.175%
BaCl2 (ml)
|
1%
H2SO4 (ml)
|
0.5
|
0.05
|
9.95
|
1
|
0.1
|
9.9
|
2
|
0.2
|
9.8
|
3
|
0.3
|
9.7
|
4
|
0.4
|
9.6
|
5
|
0.5
|
9.5
|
6
|
0.6
|
9.4
|
7
|
0.7
|
9.3
|
8
|
0.8
|
9.2
|
9
|
0.9
|
9.1
|
10
|
1.0
|
9.0
|
Tutup
tabung dengan rapat dan simpan pada suhu ruang di tempat gelap. Larutan ini
akan stabil paling tidak untuk 6 bulan. Untuk menggunakannya, kocok tabung
beberapa kali (atau menggunakan vortex mixer) untuk mensuspensi ulang endapan
barium sulfat. Perbadingan terbaik antara bakteri dan Mc Farland dilakukan
menggunakan latar belakan garis horizontal hitam putih.
